泡球蚴18基因的克隆、原核表达质粒的构建及其初步表达的研究 被引量：10

1

作者 王俨 林仁勇 +7 位作者 丁剑冰 卢晓梅 张静萍 王星 梁晓慧 张亚楼 张琰 温浩 《新疆医科大学学报》 CAS 2005年第1期18-20,共3页

目的: 克隆、分析泡球蚴 18 (Em18)抗原基因,构建 pET41a Em18 原核表达质粒,并初步诱导表达Em18重组蛋白。方法: DNAman软件设计引物,RT PCR法克隆 Em18 cDNA并构建 pMD18 T/Em18 质粒,测序确定序列,利用DNAman和BLAST软件,对其进行基... 目的: 克隆、分析泡球蚴 18 (Em18)抗原基因,构建 pET41a Em18 原核表达质粒,并初步诱导表达Em18重组蛋白。方法: DNAman软件设计引物,RT PCR法克隆 Em18 cDNA并构建 pMD18 T/Em18 质粒,测序确定序列,利用DNAman和BLAST软件,对其进行基因序列分析。构建 pET41a Em18 原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。IPTG初步诱导和表达 rEm18 GST重组蛋白,SDS PAGE电泳检测。结果: 测序结果显示Em18抗原基因长度为 486 bp,编码 161 个氨基酸。BLAST 比对分析表明为一新序列并被 GenBank 收录(AY513691)。构建的 pET41a Em18原核表达质粒,经 IPTG诱导后,SDS PAGE检测表明 rEm18 GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为50 KDa处有表达条带。结论: 成功克隆并构建了 pET41a Em18 原核表达质粒,初步诱导表达出 rEm18 GST重组蛋白,为新一代包虫病诊断试剂盒的研制奠定基础。 展开更多

关键词 泡球蚴 Em18基因 重组蛋白

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社会网络理论在专利引用中的应用 被引量：12

2

作者 王俨 郭婕婷 肖国华 《情报理论与实践》 CSSCI 北大核心 2008年第3期364-366,共3页

由于专利价值的不断提升,出现了众多专利分析方法以评价专利价值。其中,专利引用作为一种重要的专利评价方法越来越受到人们的关注。本文运用社会网络理论,尤其是社会网络理论中的向心度分析和结构空洞分析,结合专利引用的特点,构建专... 由于专利价值的不断提升,出现了众多专利分析方法以评价专利价值。其中,专利引用作为一种重要的专利评价方法越来越受到人们的关注。本文运用社会网络理论,尤其是社会网络理论中的向心度分析和结构空洞分析,结合专利引用的特点,构建专利引用网络以判断网络中各专利的重要性和技术发展趋势等。 展开更多

关键词 专利 社会网络 评估方法 分析

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泡球蚴Em18重组蛋白的表达及其抗原性检测的研究 被引量：15

3

作者 王俨 林仁勇 +7 位作者 丁剑冰 卢晓梅 张静萍 王星 梁晓慧 张亚楼 张琰 温浩 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2005年第1期33-36,共4页

　目的　构建泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的Em18重组蛋白,为包虫病诊断试剂的研制奠定基础。　方法　用DNAman软件设计引物,分别在引物5′端和3′端添加EcoRⅠ和 XhoⅠ酶切位点,以pMD18 T/Em18原核表达... 　目的　构建泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的Em18重组蛋白,为包虫病诊断试剂的研制奠定基础。　方法　用DNAman软件设计引物,分别在引物5′端和3′端添加EcoRⅠ和 XhoⅠ酶切位点,以pMD18 T/Em18原核表达质粒为模板,PCR扩增Em18基因片断,经酶切,克隆入原核表达载体 pET 41a(+),构建原核表达质粒 pET41a Em18;转化大肠埃希菌BL21(DE3),酶切、PCR及测序鉴定其插入序列的正确性。经 IPTG诱导表达 rEm18 GST重组蛋白和GST重组蛋白,用谷光甘肽 Sepharose 4B亲合层析柱分别进行纯化,通过 SDS PAGE和Western blot试验分析鉴定。　结果　测序表明构建的 pET41a Em18 原核表达质粒均为正确连接,插入 Em18 基因片断为486 bp。SDS PAGE检测表明Em18基因以 rEm18 GST重组蛋白的方式得到成功表达,在相对分子质量单位 50ku处有表达条带;Western blot分析显示,rEm18 GST重组蛋白能被泡型棘球蚴病人阳性血清识别,具有良好的抗原性。　结论　成功构建了 pET41a Em18原核表达质粒,获得的 rEm18 GST重组蛋白具有生物活性和抗原性,有望应用于泡型包虫病诊断试剂的研制。 展开更多

关键词 泡球蚴 Em18基因 原核表达 鉴定

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LPS促进舌苔形成相关细胞凋亡的分子机制 被引量：5

4

作者 王俨 张军峰 +3 位作者 董伟 孟玉芬 姜淼 詹瑧 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期1003-1007,共5页

目的探讨脂多糖影响舌苔形成相关细胞凋亡的分子机制。方法 LPS作用于撤血清舌鳞癌TCA-8113细胞,MTT法检测细胞增殖活性,Transwell研究细胞迁移,电镜观察细胞超微结构,ELISA检测PGE2含量,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,免疫印迹检测蛋... 目的探讨脂多糖影响舌苔形成相关细胞凋亡的分子机制。方法 LPS作用于撤血清舌鳞癌TCA-8113细胞,MTT法检测细胞增殖活性,Transwell研究细胞迁移,电镜观察细胞超微结构,ELISA检测PGE2含量,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,免疫印迹检测蛋白表达。结果 12.5~100mg/L LPS可显著抑制撤血清舌鳞癌TCA-8113细胞增殖活性和细胞迁移,呈剂量依赖性。100 mg/L LPS导致细胞表面微绒毛消失、细胞线粒体肿胀空泡化、细胞内出现白色脂质样空泡结构。LPS可以改变撤血清舌鳞癌TCA-8113细胞周期分布,促进细胞凋亡,25 mg/L和50 mg/L LPS可以上调NF-κB p65、Bax、COX-2表达水平,下调NF-κB p50、Bcl-2表达水平,促进PGE2分泌,抵抗细胞快速凋亡。结论 LPS可以促进舌苔形成相关细胞凋亡,与Cox-2信号通路可能存在交互作用。 展开更多

关键词 脂多糖 舌苔 细胞凋亡

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形成性评价在中医院校免疫学教学中的运用 被引量：4

5

作者 王俨 詹臻 +1 位作者 张伟伟 佟书娟 《中国中医药现代远程教育》 2015年第8期98-99,共2页

目的初谈形成性评价在中医院校医学免疫学教学运用的效果。方法从学生的学习能力、学习兴趣、学习主动性以及教师教学质量等方面分析形成性评价在中医院校免疫学教学中开展后的实际效果。结果形成性评价提高了学生的学习能力、学习兴趣... 目的初谈形成性评价在中医院校医学免疫学教学运用的效果。方法从学生的学习能力、学习兴趣、学习主动性以及教师教学质量等方面分析形成性评价在中医院校免疫学教学中开展后的实际效果。结果形成性评价提高了学生的学习能力、学习兴趣和主动性;提高了教师的教学质量;且能更合理地评价学生学习效果,但仍存在不足之处。结论形成性评价有着终结性评价无法相比的优点,但如何更好地在中医院校免疫学教学中开展形成性评价有待进一步研究。 展开更多

关键词 形成性评价 免疫学教学 中医院校

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Em18抗原及其血清学诊断价值的研究进展

6

作者 王俨 林仁勇 +1 位作者 丁剑冰 温浩 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2004年第6期381-383,共3页

关键词 多房棘球绦虫 抗原 肿瘤 血清学诊断 人体脏器 泡型包虫病 及时治疗 无性繁殖 幼虫 寄生虫病

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纪念广州会议召开20周年 展望我院文献情报系统未来发展 被引量：2

7

作者 王俨 《图书情报工作动态》 1998年第6期16-17,共2页

关键词 中国科学院 文献情报系统 图书情报 工作会议

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细粒棘球绦虫Eg95抗原基因疫苗体外瞬时表达及对小鼠诱导的免疫应答 被引量：32

8

作者 林仁勇 丁剑冰 +5 位作者 卢晓梅 王笑峰 阿孜古丽 魏晓丽 王俨 温浩 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期204-208,共5页

目的　检测细粒棘球绦虫Eg95抗原基因疫苗 (pcDNA3 Eg95 )体外瞬时表达 ,探讨其诱导小鼠的体液和细胞免疫效果。　方法　pcDNA3 Eg95经脂质体转染HeLa细胞瞬时表达。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测Eg95抗原信使RNA (mRNA)在HeLa... 目的　检测细粒棘球绦虫Eg95抗原基因疫苗 (pcDNA3 Eg95 )体外瞬时表达 ,探讨其诱导小鼠的体液和细胞免疫效果。　方法　pcDNA3 Eg95经脂质体转染HeLa细胞瞬时表达。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测Eg95抗原信使RNA (mRNA)在HeLa细胞中的表达 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)和蛋白质印迹法 (Westernblot ting)检测Eg95蛋白的瞬时表达情况。pcDNA3 Eg95基因疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,ELISA检测IgG和IgG2a水平 ,四甲基偶氮唑盐试验 (MTT法 )检测免疫小鼠T淋巴细胞增殖反应。　结果　RT PCR检测结果显示 ,pcD NA3 Eg95瞬时表达组有Eg95抗原基因mRNA表达 ,ELISA和Westernblotting检测结果表明 ,可在HeLa细胞中特异性表达Eg95蛋白。用 pcDNA3 Eg95基因疫苗免疫BALB/c小鼠 ,第 3周出现特异性IgG免疫应答 ,持续升高至第 10周 ,显著高于对照组。从第 2周开始 ,小鼠血清IgG2a应答即为阳性 ,且长时间 (至第 10周 )维持较高水平 ,与 pcD NA3空质粒组比较 ,其差异具有非常显著性意义 (P <0 0 1)。用原核表达的Eg95重组蛋白刺激免疫小鼠脾细胞 ,有明显的T细胞增殖反应。pcDNA3 Eg95基因疫苗免疫组刺激指数明显高于pcDNA3空质粒组 (P <0 0 1)。结论　pcDNA3 Eg95基因疫苗可诱发小鼠产生特异的体液免疫和细? 展开更多

关键词 免疫小鼠 PCDNA3 瞬时表达 抗原基因 体外 基因疫苗 细粒棘球绦虫 白刺 RT-PCR检测 诱导

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细粒棘球绦虫Eg95基因疫苗和重组抗原诱导小鼠免疫应答的比较研究 被引量：9

9

作者 丁剑冰 马秀敏 +4 位作者 魏晓丽 林仁勇 王俨 张静萍 温浩 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期347-351,共5页

目的观察比较细粒棘球绦虫Eg95重组抗原和基因疫苗诱导小鼠的免疫应答状况。方法实验组和对照组小鼠分别注射Eg95重组抗原(rEg95)、费氏佐剂(FCA)、pcDNA3-Eg95基因疫苗、pcDNA3质粒和生理盐水,收集各组血清用酶联免疫吸附(ELISA法)检... 目的观察比较细粒棘球绦虫Eg95重组抗原和基因疫苗诱导小鼠的免疫应答状况。方法实验组和对照组小鼠分别注射Eg95重组抗原(rEg95)、费氏佐剂(FCA)、pcDNA3-Eg95基因疫苗、pcDNA3质粒和生理盐水,收集各组血清用酶联免疫吸附(ELISA法)检测抗体IgG和IgG2a亚类水平;采集脾细胞用四甲基偶氮唑盐试验(MTT法)检测免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖反应。结果rEg95免疫组小鼠在第二次免疫后开始检测到抗Eg95抗原的IgG,并随着免疫次数的增多,血清抗体效价升高,在第1次免疫后第10周时,免疫抗体滴度可达到1∶25,600。Eg95基因疫苗免疫的小鼠产生抗体滴度随免疫次数的增加而升高,最高可达1∶3,200,但是低于Eg95重组蛋白免疫小鼠产生的抗体滴度水平。pcDNA3-Eg95免疫组产生IgG2a亚类抗体水平明显高于对照组和rEg95组。在第四次免疫后,进行淋巴细胞转化试验,MTT法检测证实rEg95和pcD-NA3-Eg95免疫的小鼠,其脾细胞均可在体外被特异性刺激增生。结论细粒棘球绦虫Eg95重组抗原和基因疫苗均可诱发小鼠产生特异性免疫应答。 展开更多

关键词 细粒棘球绦虫 Eg95重组抗原 基因疫苗 免疫应答 小鼠

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细粒棘球绦虫Eg95重组蛋白诱导小鼠免疫应答的研究 被引量：27

10

作者 丁剑冰 魏晓丽 +4 位作者 马秀敏 林仁勇 王俨 张静萍 温浩 《新疆医科大学学报》 CAS 2005年第4期305-307,共3页

目的:探讨细粒棘球绦虫Eg95重组蛋白诱导小鼠的免疫应答效果。方法:设立Eg95重组蛋白免疫组(rEg95组)和对照组(NS组)小鼠分别注射Eg95重组蛋白、福氏佐剂和生理盐水,收集各组血清用酶联免疫吸附(ELISA法)检测IgG水平;采集脾细胞用四甲... 目的:探讨细粒棘球绦虫Eg95重组蛋白诱导小鼠的免疫应答效果。方法:设立Eg95重组蛋白免疫组(rEg95组)和对照组(NS组)小鼠分别注射Eg95重组蛋白、福氏佐剂和生理盐水,收集各组血清用酶联免疫吸附(ELISA法)检测IgG水平;采集脾细胞用四甲基偶氮唑盐试验(MTT法)检测免疫小鼠的淋巴细胞增殖反应。结果:Eg95重组蛋白免疫小鼠在第2次免疫后开始检测到抗Eg95抗原的IgG,并随着免疫次数的增多,血清抗体效价升高,在第1次免疫后第10周时,免疫抗体滴度可达到1∶25600。在第4次免疫后,进行淋巴细胞转化实验,MTT法检测证实Eg95重组蛋白免疫的小鼠,其脾细胞可在体外被特异性刺激增生。结论:细粒棘球绦虫Eg95重组蛋白可诱发小鼠产生特异的体液免疫和细胞免疫应答。 展开更多

关键词 细粒棘球绦虫 Eg95重组蛋白 免疫应答

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Em18.3重组蛋白的表达及其免疫诊断特性的研究 被引量：7

11

作者 林仁勇 张春桃 +7 位作者 温浩 王俊芳 王星 王俨 卢晓梅 张静萍 张琰 无 《新疆医科大学学报》 CAS 2007年第4期332-335,共4页

目的:在大肠杆菌中表达和纯化截短的泡球蚴rEm18.3抗原重组蛋白,对其免疫诊断特性进行鉴定。方法:IPTG诱导pET41a-Em18.3原核表达质粒,表达和纯化rEm18.3-GST重组蛋白,SDS-PAGE电泳及West-ern blot法对其进行初步鉴定,ELISA法确定其免... 目的:在大肠杆菌中表达和纯化截短的泡球蚴rEm18.3抗原重组蛋白,对其免疫诊断特性进行鉴定。方法:IPTG诱导pET41a-Em18.3原核表达质粒,表达和纯化rEm18.3-GST重组蛋白,SDS-PAGE电泳及West-ern blot法对其进行初步鉴定,ELISA法确定其免疫诊断特性。结果:rEm18.3-GST重组蛋白得到成功表达,SDS-PAGE电泳显示相对分子量为45kDa。Western blot结果表明,rEm18.3-GST重组蛋白能被AE病人阳性血清识别。对56例多房棘球蚴病(AE)、88例细粒棘球蚴病(CE)、24例其他寄生虫病、24例其他疾病和24例健康者共236份血清进行ELISA检测结果显示,对AE血清诊断的敏感性为10.7%,特异性为99.4%,阳性预测值85.7%,阴性预测值78.1%。结论:rEm18.3-GST免疫诊断价值较低,Em18抗原重要的表位可能位于1-40位氨基酸。 展开更多

关键词 泡球蚴 Em18重组蛋白 免疫检测

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EM18-GST原核表达载体的构建及空间结构的生物信息学分析 被引量：5

12

作者 周晓涛 周文涛 +6 位作者 杨晨晨 张蓓 刘献飞 王俨 张传山 吕国栋 林仁勇 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第10期899-902,共4页

目的构建GST-EM18原核表达质粒,优化EM18-GST重组蛋白诱导表达条件,通过生物信息学预测EM18蛋白的空间结构。方法以pMD18-T/Em18为模板,扩增EM18基因的CDS区,构建pGEX-3X-EM18,设计不同诱导表达条件表达EM18-GST蛋白。通过各种在线网站... 目的构建GST-EM18原核表达质粒,优化EM18-GST重组蛋白诱导表达条件,通过生物信息学预测EM18蛋白的空间结构。方法以pMD18-T/Em18为模板,扩增EM18基因的CDS区,构建pGEX-3X-EM18,设计不同诱导表达条件表达EM18-GST蛋白。通过各种在线网站对EM18蛋白空间结构进行生物信息学预测。结果成功构建GST-EM18原核表达质粒,以1mmol/LIPTG于37℃诱导4h,蛋白表达较好;生物信息学预测EM18蛋白N端为无规卷曲,之后紧连两个α螺旋,C末端为无规卷曲和较短的片层结构。结论成功构建了GST-EM18原核表达质粒,表达的EM18蛋白含有无规则卷曲,可能是抗原表位所在位置。 展开更多

关键词 EM18 蛋白质空间结构 生物信息学预测

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环孢素A对小鼠Th17细胞分化的影响 被引量：3

13

作者 王俨 吴长有 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期675-678,684,共5页

目的:观察在抗CD3单克隆抗体(mAb)+rIL-23刺激的条件下,环孢素A(CsA)对Th17细胞分化的影响。方法:小鼠脾淋巴细胞分别使用抗CD3 mAb、抗CD3 mAb+rIL-23及抗CD3 mAb+rIL-23+不同浓度的CsA刺激后,用ELISA检测IL-17和IFN-γ的水平,并用流... 目的:观察在抗CD3单克隆抗体(mAb)+rIL-23刺激的条件下,环孢素A(CsA)对Th17细胞分化的影响。方法:小鼠脾淋巴细胞分别使用抗CD3 mAb、抗CD3 mAb+rIL-23及抗CD3 mAb+rIL-23+不同浓度的CsA刺激后,用ELISA检测IL-17和IFN-γ的水平,并用流式细胞仪在单个细胞水平上检测产生IL-17的T细胞亚群。结果:单独抗CD3 mAb能诱导少量的IL-17产生,加入IL-23后呈剂量依赖的方式明显增加IL-17的产生。CsA对抗CD3 mAb+rIL-23诱导的Th17细胞分化呈剂量依赖性的抑制作用。CsA不仅抑制早期Th17的分化,当细胞激活48小时后,CsA对Th17细胞的分化仍有抑制作用。CsA除了抑制Th17细胞分化外,对IFN-γ和IL-2的产生也有抑制作用。此外,T细胞亚群分析的结果表明IL-17主要由CD4+T细胞产生,而CD8+T细胞几乎不产生IL-17。结论:CsA可以抑制Th17细胞的分化,进一步阐明了CsA免疫抑制及抗炎作用的机制,为临床上应用CsA提供科学理论和实验依据。 展开更多

关键词 环胞素A TH17 IFN-Γ

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3种截短的泡球蚴Em18基因原核表达质粒的构建、表达及鉴定 被引量：5

14

作者 张春桃 林仁勇 +7 位作者 王俊芳 王星 王俨 卢晓梅 张静萍 张琰 张彤 温浩 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第3期189-192,共4页

目的构建3种截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的3种重组蛋白,并对其进行初步鉴定。方法DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建3种截短的pET41a-Em18.1、Em18.2和Em18.3原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确... 目的构建3种截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的3种重组蛋白,并对其进行初步鉴定。方法DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建3种截短的pET41a-Em18.1、Em18.2和Em18.3原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性;IPTG诱导、表达和纯化rEm18.1-GST、rEm18.2-GST和rEm18.3-GST重组蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blot进行初步鉴定。结果成功构建了3种截短的pET41a-Em18.1、Em18.2和Em18.3重组表达质粒;SDS-PAGE检测表明rEm18.1-GST、rEm18.2-GST、rEm18.3-GST重组蛋白得到成功表达,在分子质量单位为41、45.5和45.5ku处有表达条带;Western blot显示3种重组蛋白均能被AE病人血清识别。结论成功构建了截短的pET41a-Em18.1、pET41a-Em18.2和pET41a-Em18.3原核表达质粒,表达的3种重组蛋白均具有良好的抗原性,为Em18抗原表位分析奠定了基础。 展开更多

关键词 泡球蚴 Eml8重组蛋白 免疫检测

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补益剂的免疫药理作用研究进展 被引量：4

15

作者 袁婷 王任 +2 位作者 高雅楠 王俨 佟书娟 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期3025-3027,共3页

现代药理研究证明,补益剂不仅具有补益作用,还具有免疫调节作用,能增强免疫器官胸腺和脾脏指数,提高骨髓造血功能,促进淋巴细胞转化和抗体生成,提高机体免疫功能。此外,部分补益方还可以通过对性腺激素以及下丘脑-垂体-肾上腺-性腺轴的... 现代药理研究证明,补益剂不仅具有补益作用,还具有免疫调节作用,能增强免疫器官胸腺和脾脏指数,提高骨髓造血功能,促进淋巴细胞转化和抗体生成,提高机体免疫功能。此外,部分补益方还可以通过对性腺激素以及下丘脑-垂体-肾上腺-性腺轴的调节,提高机体生殖内分泌系统的功能。文章通过综述补益剂免疫药理学方面的研究进展,以探讨它们之间的某些特点和共性,为补益剂免疫调节作用进一步深入研究和开拓其与神经生殖内分泌之间的联系提供参考依据。 展开更多

关键词 补益剂 免疫药理 内分泌-免疫网络

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截短的泡球蚴Em18基因原核表达质粒的构建、表达及鉴定 被引量：4

16

作者 张春桃 林仁勇 +7 位作者 王俊芳 王星 王俨 卢晓梅 张静萍 张琰 张彤 温浩 《新疆医科大学学报》 CAS 2006年第4期283-285,288,共4页

目的:构建截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的重组蛋白,并对其进行初步鉴定。方法:DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建截短的pET41a-Em18．1原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。异丙基硫代-β-D-... 目的:构建截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的重组蛋白,并对其进行初步鉴定。方法:DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建截短的pET41a-Em18．1原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18．1-GST重组蛋白,采用SDS-PAGE 电泳及Western免疫印迹法对其进行初步鉴定。结果:成功构建出截短的pET41a-Em18．1,SDS-PAGE检测表明rEm18．1-GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为41 kDa处有表达条带。Western blot结果显示 rEm18．1-GST重组蛋白能被AE病人阳性血清识别。结论:截短的pET41a-Em18．1原核表达质粒表达的 rEm18．1-GST重组蛋白具有良好的抗原性,为Em18抗原表位的分析奠定基础。 展开更多

关键词 泡球蚴 Em18基因 重组蛋白

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泡球蚴Em18多克隆抗血清的制备和鉴定 被引量：3

17

作者 王俊芳 林仁勇 +6 位作者 张春桃 王星 王俨 卢晓梅 张琰 张建龙 温浩 《新疆医科大学学报》 CAS 2007年第4期336-338,共3页

目的:制备和鉴定泡球蚴Em18抗原的多克隆抗血清。方法:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达重组质粒pET41a-Em18,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18-GST蛋白,免疫BALB/c小鼠,制备鼠源抗Em18多克隆抗体,采用ELISA和Western b... 目的:制备和鉴定泡球蚴Em18抗原的多克隆抗血清。方法:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达重组质粒pET41a-Em18,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18-GST蛋白,免疫BALB/c小鼠,制备鼠源抗Em18多克隆抗体,采用ELISA和Western blot法鉴定其特异性。结果:(1)SDS-PAGE检测表明,rEm18-GST蛋白得到成功表达,在相对分子量为50kDa处有表达条带。(2)纯化后获得高纯度的rEm18-GST蛋白。(3)ELISA结果表明,抗Em18抗血清的抗体滴度为1∶25600;Western blot结果表明抗Em18抗血清能与rEm18-GST蛋白发生特异性结合。结论:获得了特异性识别rEm18-GST蛋白的多克隆抗体,为进一步筛选Em18模拟抗原表位奠定基础。 展开更多

关键词 泡球蚴 Em18抗原 多克隆抗血清 制备

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抗泡球蚴重组Em18抗原多克隆抗体的纯化与鉴定 被引量：3

18

作者 杨晨晨 张蓓 +8 位作者 王俊芳 张春桃 王俨 许晏 王星 张静萍 张琰 温浩 林仁勇 《新疆医科大学学报》 CAS 2007年第4期339-342,共4页

目的:制备抗泡球蚴18(Em18)抗原多克隆抗体,纯化并鉴定。方法:表达并纯化rEm18-GST蛋白。用纯化后的蛋白作为免疫原,免疫新西兰白兔获得抗rEm18-GST的多克隆抗体IgG,采用ELISA法检测抗体效价,进一步纯化抗体,获得抗Em18特异性多克隆抗体... 目的:制备抗泡球蚴18(Em18)抗原多克隆抗体,纯化并鉴定。方法:表达并纯化rEm18-GST蛋白。用纯化后的蛋白作为免疫原,免疫新西兰白兔获得抗rEm18-GST的多克隆抗体IgG,采用ELISA法检测抗体效价,进一步纯化抗体,获得抗Em18特异性多克隆抗体IgG,用Western blot及ELISA法检测并进行初步鉴定。结果:免疫制备获得兔抗rEm18-GST抗体,随着免疫次数的增加,抗体滴度不断升高,于第10周达到最高。ELISA检测抗体效价为1∶51200。Western blot及ELISA法鉴定表明Em18-GST抗体去除了与GST的交叉反应。结论:获得了去除与GST交叉反应的抗Em18多克隆抗体,为进行噬菌体肽库筛选奠定基础。 展开更多

关键词 泡球蚴 多克隆抗体 纯化

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泡球蚴Em18重组蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化方法的优化 被引量：3

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作者 王俊芳 王星 +6 位作者 张春桃 王俨 林仁勇 卢晓梅 张琰 张建龙 温浩 《新疆医科大学学报》 CAS 2007年第4期346-348,共3页

目的:筛选和优化泡球蚴Em18重组蛋白在大肠杆菌中表达和纯化的方法,为进一步筛选Em18抗原表位奠定基础。方法:原核表达pET41a-Em18重组质粒,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达,获得rEm18-GST蛋白,采用不同的超声程序破碎大肠... 目的:筛选和优化泡球蚴Em18重组蛋白在大肠杆菌中表达和纯化的方法,为进一步筛选Em18抗原表位奠定基础。方法:原核表达pET41a-Em18重组质粒,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达,获得rEm18-GST蛋白,采用不同的超声程序破碎大肠杆菌细胞,分别采用GST柱、His柱及两者结合方法,改变不同的平衡、洗涤和洗脱缓冲液浓度,纯化rEm18-GST蛋白。结果:(1)rEm18-GST蛋白在相对分子质量为50kDa处有表达条带,蛋白表达量随诱导时间的延长而增加;(2)超声程序为工作1s,间歇3s,每个循环时程10min,加入蛋白酶抑制剂,可降低目的蛋白的降解;(3)采用单纯His柱可获得回收量高、纯度高的rEm18-GST蛋白。结论:(1)对含有GST-tag和His-tag双重标签重组蛋白的纯化,应用His柱更有效,更经济;(2)建立和优化一套从大肠杆菌细胞中分离纯化重组Em18蛋白的有效方法。 展开更多

关键词 Em18重组蛋白 表达和纯化 优化

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氧化应激促进舌苔形成相关细胞模型凋亡的分子机制研究 被引量：3

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作者 张莉 王俨 +4 位作者 董伟 孟玉芬 张伟伟 詹瑧 张军峰 《吉林中医药》 2016年第8期825-828,840,共5页

目的撤血清培养舌鳞癌细胞TCA-8113模拟舌苔细胞凋亡过程,过氧化氢(hydrogen dioxide,H_2O_2)刺激探讨氧化应激影响舌苔形成相关细胞模型凋亡的分子机制。方法撤血清培养舌鳞癌细胞TCA-8113,H_2O_2作用舌鳞癌细胞TCA-8113模拟氧化应激,... 目的撤血清培养舌鳞癌细胞TCA-8113模拟舌苔细胞凋亡过程,过氧化氢(hydrogen dioxide,H_2O_2)刺激探讨氧化应激影响舌苔形成相关细胞模型凋亡的分子机制。方法撤血清培养舌鳞癌细胞TCA-8113,H_2O_2作用舌鳞癌细胞TCA-8113模拟氧化应激,MTT法检测细胞增殖活性,PI染色结合流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC细胞凋亡检测,蛋白免疫印迹(western blot)检测蛋白表达,ELISA检测培养上清PGE2含量。结果 H_2O_2作用后,撤血清舌鳞癌TCA-8113细胞增殖活性显著下降并具有剂量和时间依赖性;细胞周期分布变化显著,促进细胞凋亡;下调撤血清舌鳞癌细胞NF-κB p50、Bcl-2和Bax的表达水平,上调撤血清舌鳞癌细胞NF-κB p65和COX-2的表达水平;同时,舌鳞癌细胞PGE2分泌量也表现为剂量依赖效应。结论氧化应激可以促进舌苔形成相关细胞凋亡。 展开更多

关键词 舌苔细胞模型 细胞凋亡 氧化应激 分子机制

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