目的 基于高分子量谷蛋白Tri a 26建立小麦中过敏蛋白的定性定量检测方法,对基因编辑小麦和普通对照小麦样品进行过敏蛋白含量分析与比较。方法 选择小麦中的致敏蛋白Tri a 26作为目标蛋白,筛选出该致敏蛋白的特异肽段IFWGIPALLK,人工...目的 基于高分子量谷蛋白Tri a 26建立小麦中过敏蛋白的定性定量检测方法,对基因编辑小麦和普通对照小麦样品进行过敏蛋白含量分析与比较。方法 选择小麦中的致敏蛋白Tri a 26作为目标蛋白,筛选出该致敏蛋白的特异肽段IFWGIPALLK,人工合成特异肽段,样品用100 mmol/L含4 mol/L尿素和0.1 mol/L二硫苏糖醇的Tris-HCl缓冲液(pH 8.5)匀浆提取,提取液经半胱氨酸残基烷基化后,与胰蛋白酶混匀在37℃酶解消化16 h,采用电喷雾正离子模式下多反应监测外标法定量,测定并对比基因编辑小麦和普通对照小麦中高分子量谷蛋白Tri a 26含量。结果 特异水解肽段标准溶液在10~2000 ng/mL范围内线性关系良好(r>0.999),样本中IFWGIPALLK肽段定量限为0.328 ng/g,3个浓度加标回收率在84.8%~95.4%,相对标准偏差为2.99%~6.12%(n=6)。基因编辑小麦和普通对照小麦Tri a 26含量为1.976~2.069 mg/g。结论 该方法灵敏度和特异性高,可以有效地应用于小麦中高分子量谷蛋白的检测,研究发现基因编辑小麦中高分子量谷蛋白Tri a 26的含量不高于普通对照小麦。展开更多
文摘目的 基于高分子量谷蛋白Tri a 26建立小麦中过敏蛋白的定性定量检测方法,对基因编辑小麦和普通对照小麦样品进行过敏蛋白含量分析与比较。方法 选择小麦中的致敏蛋白Tri a 26作为目标蛋白,筛选出该致敏蛋白的特异肽段IFWGIPALLK,人工合成特异肽段,样品用100 mmol/L含4 mol/L尿素和0.1 mol/L二硫苏糖醇的Tris-HCl缓冲液(pH 8.5)匀浆提取,提取液经半胱氨酸残基烷基化后,与胰蛋白酶混匀在37℃酶解消化16 h,采用电喷雾正离子模式下多反应监测外标法定量,测定并对比基因编辑小麦和普通对照小麦中高分子量谷蛋白Tri a 26含量。结果 特异水解肽段标准溶液在10~2000 ng/mL范围内线性关系良好(r>0.999),样本中IFWGIPALLK肽段定量限为0.328 ng/g,3个浓度加标回收率在84.8%~95.4%,相对标准偏差为2.99%~6.12%(n=6)。基因编辑小麦和普通对照小麦Tri a 26含量为1.976~2.069 mg/g。结论 该方法灵敏度和特异性高,可以有效地应用于小麦中高分子量谷蛋白的检测,研究发现基因编辑小麦中高分子量谷蛋白Tri a 26的含量不高于普通对照小麦。
