CRM197(Cross-reacting material 197)是白喉毒素的无毒突变体,在生物制药领域具有非常广泛的应用前景。为了实现CRM197在大肠杆菌中的无标签、可溶表达,以替代现有昂贵、复杂的白喉杆菌分泌发酵工艺,文中对目的蛋白的序列进行优化,转...CRM197(Cross-reacting material 197)是白喉毒素的无毒突变体,在生物制药领域具有非常广泛的应用前景。为了实现CRM197在大肠杆菌中的无标签、可溶表达,以替代现有昂贵、复杂的白喉杆菌分泌发酵工艺,文中对目的蛋白的序列进行优化,转化大肠杆菌经IPTG诱导,目的蛋白获得了可溶性高表达,目的蛋白约占碎菌上清总蛋白的40%。超声破菌后、经阴离子交换、肝素亲和以及脱盐三步柱上层析获得纯度高于95%的CRM197样品。细胞毒性实验证明,CRM197的IC_(50)值是白喉毒素IC_(50)值的2.1×10~7倍,是白喉类毒素IC_(50)值的9.6倍,表明文中表达的CRM197是安全无毒的。随后,比较了高、低剂量的CRM197在小鼠体内的免疫原性,发现2μg组三免后的抗体滴度与20μg组的相当,可达1︰409 600。文中建立了CRM197的无标签、高效、可溶表达的大肠杆菌表达系和快速纯化体系,获得了具有较好免疫原性和安全性的重组蛋白,为该蛋白的进一步应用奠定了基础。展开更多
目的介绍一种移植预处理后组织的冰冻切片制作方法。方法予BALB/c小鼠清髓剂量(60 Co 7.5Gy全身照射)照射后4h内输入体外培养的含有绿色荧光蛋白(GFP)内皮祖细胞(EPC),分别于移植后6、12、24、36、48、72及96h取受鼠内脏组织制作冰冻切...目的介绍一种移植预处理后组织的冰冻切片制作方法。方法予BALB/c小鼠清髓剂量(60 Co 7.5Gy全身照射)照射后4h内输入体外培养的含有绿色荧光蛋白(GFP)内皮祖细胞(EPC),分别于移植后6、12、24、36、48、72及96h取受鼠内脏组织制作冰冻切片,用免疫荧光观察组织内GFP阳性细胞分布。结果荧光显微镜下可见肝、肺中GFP、大鼠抗小鼠泛内皮细胞单克隆抗体(MECA-32)阳性细胞,脾中见GFP、CD68阳性细胞;小肠中未发现明显GFP阳性、MECA-32阳性细胞。结论对移植预处理的组织进行及时恰当的处理后,荧光显微镜下可清晰地观察到组织形态结构变化及GFP阳性细胞分布。展开更多
文摘CRM197(Cross-reacting material 197)是白喉毒素的无毒突变体,在生物制药领域具有非常广泛的应用前景。为了实现CRM197在大肠杆菌中的无标签、可溶表达,以替代现有昂贵、复杂的白喉杆菌分泌发酵工艺,文中对目的蛋白的序列进行优化,转化大肠杆菌经IPTG诱导,目的蛋白获得了可溶性高表达,目的蛋白约占碎菌上清总蛋白的40%。超声破菌后、经阴离子交换、肝素亲和以及脱盐三步柱上层析获得纯度高于95%的CRM197样品。细胞毒性实验证明,CRM197的IC_(50)值是白喉毒素IC_(50)值的2.1×10~7倍,是白喉类毒素IC_(50)值的9.6倍,表明文中表达的CRM197是安全无毒的。随后,比较了高、低剂量的CRM197在小鼠体内的免疫原性,发现2μg组三免后的抗体滴度与20μg组的相当,可达1︰409 600。文中建立了CRM197的无标签、高效、可溶表达的大肠杆菌表达系和快速纯化体系,获得了具有较好免疫原性和安全性的重组蛋白,为该蛋白的进一步应用奠定了基础。
文摘目的介绍一种移植预处理后组织的冰冻切片制作方法。方法予BALB/c小鼠清髓剂量(60 Co 7.5Gy全身照射)照射后4h内输入体外培养的含有绿色荧光蛋白(GFP)内皮祖细胞(EPC),分别于移植后6、12、24、36、48、72及96h取受鼠内脏组织制作冰冻切片,用免疫荧光观察组织内GFP阳性细胞分布。结果荧光显微镜下可见肝、肺中GFP、大鼠抗小鼠泛内皮细胞单克隆抗体(MECA-32)阳性细胞,脾中见GFP、CD68阳性细胞;小肠中未发现明显GFP阳性、MECA-32阳性细胞。结论对移植预处理的组织进行及时恰当的处理后,荧光显微镜下可清晰地观察到组织形态结构变化及GFP阳性细胞分布。
