目的建立一种基于叠氮溴化丙锭(Propidium monoazide,PMA)的定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)的方法,以快速检测甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)的感染性。方法将热灭活的HAV样品经PMA处理和曝光,通过RT-qPCR检测体系进行检测,优...目的建立一种基于叠氮溴化丙锭(Propidium monoazide,PMA)的定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)的方法,以快速检测甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)的感染性。方法将热灭活的HAV样品经PMA处理和曝光,通过RT-qPCR检测体系进行检测,优化PMA预处理浓度、孵育时间以及光解时间,建立甲肝病毒PMART-qPCR检测方法。以建立的检测方法对感染性病毒与灭活病毒混合样品、不同浓度的灭活病毒以及感染性病毒进行检测,评估其检测病毒感染性的效果。结果PMA-RT-qPCR检测方法的PMA浓度确定为50μmol/L,4℃避光孵育30min,光解30min。对热灭活HAV的RT-qPCR检测结果显示,PMA处理组与未处理组Ct值差异(ΔCt)>3.78;而对活病毒(10~2CCID_(50)/mL~10~7CCID_(50)/mL)的ΔCt值<0.5。该方法可最低分辨9 CCID_(50)的活病毒,在感染性病毒与灭活病毒混合物中检出最低27 CCID_(50)的活病毒。结论本研究建立的PMA-RT-qPCR无细胞培养方法为判断HAV的感染性提供了快速、便捷的检测方法。展开更多
