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荧光定量PCR检测珍珠鸡Tva与ALV-A gp85基因方法的建立及应用
1
作者 宁宇航 李喜月 +7 位作者 王扬扬 马晨曦 李鑫鹏 荣晴 何雷 余祖华 丁轲 陈建 《中国家禽》 北大核心 2026年第1期70-78,共9页
研究旨在探讨体内水平下珍珠鸡各组织器官中A亚群禽白血病病毒(ALV-A)组织载量与维生素_(B12)(V_(B12))的含量、Tva基因转录水平之间的关系。试验通过建立检测珍珠鸡ALV-A gp85和Tva基因的荧光定量PCR方法,定量感染ALV-A的珍珠鸡不同组... 研究旨在探讨体内水平下珍珠鸡各组织器官中A亚群禽白血病病毒(ALV-A)组织载量与维生素_(B12)(V_(B12))的含量、Tva基因转录水平之间的关系。试验通过建立检测珍珠鸡ALV-A gp85和Tva基因的荧光定量PCR方法,定量感染ALV-A的珍珠鸡不同组织中ALV-A gp85基因和Tva基因表达水平,并通过ELISA测定珍珠鸡组织中V_(B12)浓度,分析ALV-A gp85表达水平与V_(B12)组织含量和Tva基因表达水平之间的关系。结果显示:研究建立的珍珠鸡Tva基因荧光定量PCR方法灵敏度较常规PCR提升1个数量级(10倍),ALV-A gp85基因检测灵敏度提高2个数量级(100倍),仅靶基因出现特异性扩增且批内及批间变异系数均小于2%,血浆样本ALV-A阳性检出率明显高于PCR和ELISA方法,具有良好的灵敏度、特异性和稳定性。皮尔逊相关性分析显示,珍珠鸡组织器官中V_(B12)浓度与ALV-A gp85转录水平均呈负相关,而ALV-A gp85与Tva基因转录水平整体上符合正相关关系,推测V_(B12)可能通过占据Tva受体干扰ALV-A感染宿主细胞。研究表明,试验成功建立一种定量检测珍珠鸡ALV-A gp85基因和Tva基因的方法,并确定珍珠鸡中V_(B12)组织含量与ALV-A组织载量以及Tva基因表达水平之间的关系,为禽白血病的防控奠定基础。 展开更多
关键词 A亚群禽白血病病毒 TVA gp85 QRT-PCR 珍珠鸡 维生素B_(12)
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改进VMD-SVD算法与SVM的齿轮箱状态识别
2
作者 何雷 刘溯奇 张皓惟 《机械设计与制造》 北大核心 2025年第7期86-90,96,共6页
针对特种车辆齿轮箱工作环境恶劣、状态识别困难的现实问题,这里提出了一种基于自适应优化变分模态分解(Variational Mode Decomposition,简称VMD)和奇异值分解(SVD)的特征值提取方法,并结合支持向量机(Support Vector Machine,SVM)构... 针对特种车辆齿轮箱工作环境恶劣、状态识别困难的现实问题,这里提出了一种基于自适应优化变分模态分解(Variational Mode Decomposition,简称VMD)和奇异值分解(SVD)的特征值提取方法,并结合支持向量机(Support Vector Machine,SVM)构建诊断模型,应用到齿轮箱的状态识别中。首先,针对VMD分解层数K值难确定问题,结合相关系数和阈值提取有效分量,确定最优分解层数K,完成对VMD分解的自适应优化。然后用改进后的VMD算法对振动信号进行分解,用相关系数筛选出蕴含故障信息最丰富的分量进行频谱分析和SVD特征值提取,将特征值输入到构建好的支持向量机诊断模型中,根据输出结果识别齿轮箱状态。研究结果表明,该方法能有效应用于特种车辆齿轮箱状态识别,诊断正确率达到95.36%,为恶劣工况下齿轮箱状态识别提供了一种有效的应用方案。 展开更多
关键词 齿轮箱 变分模态分解 奇异值分解 支持向量机
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共表达IBDV VP2蛋白和AIV HA蛋白的重组NDV的构建 被引量：2
3
作者 王晓晓 司凯新 +7 位作者 尚珂 陈松彪 余祖华 丁轲 陈建 李日顺 郁川 何雷 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第6期748-756,共9页
为构建共表达新变异型传染性法氏囊病毒(nVarIBDV)VP2蛋白和H9亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的耐热型重组NDV,将nVarIBDV VP2基因和AIV HA基因经2A肽连接后插入重组质粒pNDV-Ⅶ-F中;然后,重组质粒与辅助质粒pTM-N/P/L共转染BHK-21细胞,拯... 为构建共表达新变异型传染性法氏囊病毒(nVarIBDV)VP2蛋白和H9亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的耐热型重组NDV,将nVarIBDV VP2基因和AIV HA基因经2A肽连接后插入重组质粒pNDV-Ⅶ-F中;然后,重组质粒与辅助质粒pTM-N/P/L共转染BHK-21细胞,拯救出共表达VP2蛋白和HA蛋白的重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA和r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2并鉴定。RT-PCR鉴定表明目的基因成功插入至重组NDV的P、M基因之间;IFA检测结果表明,重组病毒r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2感染细胞可稳定表达VP2蛋白和HA蛋白,而重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA感染细胞后仅检测到VP2蛋白表达。生物学特性检测表明2株重组病毒均具有亲本毒株的高增殖效价、低毒力和良好耐热性特点。综上所述,本研究成功地构建了共表达nVarIBDV VP2蛋白和H9N2 AIV HA蛋白的重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA和r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2,为n VarIBDV、H9N2 AIV及基因Ⅶ型NDV的综合防控提供了一种新的策略。 展开更多
关键词 新城疫病毒 传染性法氏囊病毒 VP2蛋白 禽流感病毒 HA蛋白
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牛细小病毒2型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立与应用
4
作者 杨澳飞 刘飞飞 +10 位作者 陈慧敏 余祖华 韩新雨 贾东鹭 贾钰航 陈建 魏颖 何雷 马雪连 陈松彪 丁轲 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第3期362-368,共7页
本试验旨在建立一种牛细小病毒2型(bovine parvovirus,BPV-2)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。首先参考数据库中不同BPV-2序列,设计VP2基因保守区域特异性引物,优化反应体系,初步建立一种BPV-2特异性SYBRGreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)... 本试验旨在建立一种牛细小病毒2型(bovine parvovirus,BPV-2)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。首先参考数据库中不同BPV-2序列,设计VP2基因保守区域特异性引物,优化反应体系,初步建立一种BPV-2特异性SYBRGreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)方法。结果显示,扩增VP2基因片段长度约156 bp,符合目的基因片段大小,经鉴定所构建的重组质粒正确。用该质粒测得SYBR GreenⅠ荧光定量PCR的最低检测限为3.32×10^(1)copies/μL,而常规PCR方法检测限为3.32×10^(3)copies/μL,表明本研究方法敏感性较高。用该方法检测牛细小病毒Ⅰ型、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛疱疹病毒I型时结果均为阴性,表明本方法特异性强。重复性试验结果表明,组内和组间重复变异率均小于1%,表明该方法具有良好的重复性。分别采用本研究所建立的方法和文献中发表的方法对80份腹泻牛粪便进行检测比较。结果显示,两种方法的阳性检出率均为11%(9/80),总符合率达100%。以上结果表明本研究建立基于BPV-2 VP2基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有良好特异性、灵敏性、重复性,为BPV-2的临床流行病学调查及快速检测提供了新的技术支撑。 展开更多
关键词 牛细小病毒2型 VP2基因 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR 建立 应用
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抗牛病毒性腹泻病毒的策略
5
作者 张静雨 宋君竹 +4 位作者 陈建 陈松彪 何雷 余祖华 魏颖 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第8期1095-1105,共11页
牛病毒性腹泻病(BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的一种急性、病毒性传染病,可水平或垂直传播造成犊牛的先天感染和持续感染。随着感染趋势不断扩展,使得该病严重威胁着中国畜牧业的发展,而且BVDV感染细胞的类型、宿主趋向性与E2蛋... 牛病毒性腹泻病(BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的一种急性、病毒性传染病,可水平或垂直传播造成犊牛的先天感染和持续感染。随着感染趋势不断扩展,使得该病严重威胁着中国畜牧业的发展,而且BVDV感染细胞的类型、宿主趋向性与E2蛋白相关,但由于E2蛋白变异率较高,从而使BVDV能够逃脱宿主的免疫。我们对于BVDV病毒学的认识还处于较为浅显的阶段,尤其是在深入探究其起源,并基于此理解其进化历程以及宿主免疫反应等方面还远远不够。有限的知识阻碍了根除该病毒有效方法的发展,给防治带来很大困难。因其传染性强、致病毒株种类多且易发生变异等特点,给牛病毒性腹泻病的防控带来很大挑战,又由于当下没有特效的抗病毒药物和相关疫苗,因此寻找合适的抗病毒药物变得尤为重要。本文系统的描述了抗BVDV研究的最新进展,特别那些有可能改变当前抗BVDV方法的技术。新技术方法的结合可能会提供创造性的见解,以指导未来的BVD控制和预防。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病 抗病毒药物 BVD疫苗 抗BVDV作用机制
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共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒的构建及其免疫原性研究 被引量：10
6
作者 何雷 张彦明 +7 位作者 徐彦召 唐青海 王静 杨小云 代晨 向华 常鹏祥 林鸷 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期385-391,共7页
为研制猪瘟活载体疫苗,构建共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒并研究其免疫原性。应用PCR方法从pMD19-T-E2质粒和pMD19-T-pIL2质粒中分别扩增E2基因和pIL-2基因,将扩增的全长E2基因和pIL-2的编码区基因序列通过柔性... 为研制猪瘟活载体疫苗,构建共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒并研究其免疫原性。应用PCR方法从pMD19-T-E2质粒和pMD19-T-pIL2质粒中分别扩增E2基因和pIL-2基因,将扩增的全长E2基因和pIL-2的编码区基因序列通过柔性接头序列(5个甘氨酸密码子)串联,插入腺病毒穿梭载体AdTrack中,在受体菌中与骨架载体AdEasy同源重组。重组质粒AdEasy-E2-pIL-2转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒rAd-E2-pIL-2。用rAd-E2-pIL-2免疫家兔,经兔体交互免疫试验评定其免疫效果。结果显示,经RT-PCR和West-ern blot检测,成功构建了rAd-E2-pIL-2,重组病毒滴度达108.12PFU/mL。rAd-E2-pIL-2接种家兔后刺激接种兔产生猪瘟病毒特异性抗体,淋巴细胞转化试验结果显示猪瘟病毒诱导兔淋巴细胞特异性增殖,攻毒后rAd-E2-pIL-2接种兔和猪瘟病毒C株接种兔均未出现定型热反应。研究结果表明,rAd-E2-pIL-2免疫兔可以预防猪瘟病毒C株接种引发的体温反应,rAd-E2-pIL-2可望成为猪瘟候选疫苗。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 猪白细胞介素2 重组腺病毒 细胞因子佐剂
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乔木茵芋中的香豆素类化合物及其抗炎活性研究 被引量：21
7
作者 何雷 杨顺丽 +3 位作者 吴德松 崔涛 韦迪 丁中涛 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期811-813,共3页
目的:对乔木茵芋进行了化学成分研究。方法:采用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶LH-20柱色谱、RP-C18柱色谱等方法分离化学成分,1H,13C-NMR等方法进行结构鉴定;并采用小鼠二甲苯耳肿胀法检测乔木茵芋总提物的抗炎活性。结果:从中分离鉴定了6个... 目的:对乔木茵芋进行了化学成分研究。方法:采用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶LH-20柱色谱、RP-C18柱色谱等方法分离化学成分,1H,13C-NMR等方法进行结构鉴定;并采用小鼠二甲苯耳肿胀法检测乔木茵芋总提物的抗炎活性。结果:从中分离鉴定了6个香豆素类化合物:伞形花内酯(1),东莨菪内酯(2),东莨菪苷(3),紫花前胡苷元(4),茵芋苷(5),6,7-二甲氧基-香豆素(6);抗炎试验结果显示:乔木茵芋总提物中、高剂量组能明显抑制由二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀。结论:所有化合物均为首次从该种植物中分离得到,且乔木茵芋在抗炎方面具有进一步研究的价值。 展开更多
关键词 乔木茵芋 香豆素 抗炎活性
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猪传染性胃肠炎病毒ORF7蛋白在ST细胞中定位及其对病毒复制影响的研究 被引量：5
8
作者 何雷 董玲娟 +6 位作者 张彦明 宋嘉兴 郁川 余祖华 张春杰 丁轲 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期543-548,共6页
为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)ORF7蛋白的亚细胞定位及其在TGEV复制中的作用。本研究通过RT-PCR扩增TGEV ORF7基因,将其与真核表达载体pEGFP-C1和pEGFP-N1相连接,构建表达载体pGFP-ORF7(GFP融合在TGEV ORF7的-NH2端)和pORF7-GFP(GFP... 为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)ORF7蛋白的亚细胞定位及其在TGEV复制中的作用。本研究通过RT-PCR扩增TGEV ORF7基因,将其与真核表达载体pEGFP-C1和pEGFP-N1相连接,构建表达载体pGFP-ORF7(GFP融合在TGEV ORF7的-NH2端)和pORF7-GFP(GFP融合在ORF7的-COOH端)。分别将这两个质粒转染至ST细胞,western blot检测融合蛋白GFP-ORF7和ORF7-GFP的表达。通过生物信息学分析和激光共聚焦确定TGEV ORF7蛋白的亚细胞定位。在此基础上,通过细胞病变观察和荧光定量PCR检测TGEV ORF7蛋白对TGEV复制的影响。结果显示,本研究正确构建了真核表达载体pGFP-ORF7和pORF7-GFP,western blot检测结果表明融合蛋白GFP-ORF7和ORF7-GFP均正确表达,TGEV ORF7蛋白大小约为9 ku;结合生物信息学分析和激光共聚焦共定位结果显示TGEV ORF7特异性的定位于ST细胞的内质网中,其定位和其N端的信号肽序列有关;荧光定量PCR检测结果显示,过表达ORF7蛋白后TGEV mRNA转录水平降低99%,表明ORF7蛋白参与调控TGEV的复制。本研究为TGEV ORF7蛋白功能的研究提供了参考依据。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 ORF7蛋白 亚细胞定位 过表达 病毒复制
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胰岛素抵抗状态下2型糖尿病患者不同水平糖化血红蛋白与心肌损伤指标间关系的观察 被引量：4
9
作者 何雷 赵星辰 +5 位作者 周斌 欧阳奋竞 尹瀚鹏 年碧霄 谭泽世 蔡德鸿 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期237-239,共3页
目的探讨IR状态下T2DM患者不同水平HbA1c与肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)与肌酸激酶比值(CK-MB/CK)、肌钙蛋白Ⅰ(TnⅠ)间的关系。方法选取T2DM患者168例,根据HbA1c水平分为3组,A组(HbA1c≤6.4%)56例,B组(7.1%<HbA1c≤7.8%)56... 目的探讨IR状态下T2DM患者不同水平HbA1c与肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)与肌酸激酶比值(CK-MB/CK)、肌钙蛋白Ⅰ(TnⅠ)间的关系。方法选取T2DM患者168例,根据HbA1c水平分为3组,A组(HbA1c≤6.4%)56例,B组(7.1%<HbA1c≤7.8%)56例,C组(HbA1c≥9.0%)56例,检测并比较3组CK、CK-MB、CK-MB/CK、TnⅠ和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果 B组CK-MB/CK最低,与C组比较差异有统计学意义[(0.10±0.04)vs(0.13±0.05),P=0.004];TnⅠ阳性率A组30.5%,B组32.1%,C组37.5%,差异无统计学意义(P>0.05);A组HOMA-IR最低(2.96±3.57),与B组(4.11±2.91)、C组(4.17±4.93)相比差异有统计学意义(P=0.0000)。结论 CK-MB/CK在A、B、C组中分别为(0.12±0.06)、(0.10±0.04)、(0.13±0.05),但仅据A、B组间差异有统计学意义并不能判断CK-MB/CK越小,对心肌损害越少,仍需进一步研究证实。 展开更多
关键词 糖尿病 2型 糖化血红蛋白 肌酸激酶 肌酸激酶同工酶 肌钙蛋白Ⅰ 胰岛素抵抗指数
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辙叉用新型贝氏体钢的滚动接触疲劳性能 被引量：5
10
作者 何雷 栾道成 +2 位作者 陈晓男 王艳 熊万全 《金属热处理》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期51-54,共4页
分别对用普通冶炼工艺和电渣重熔工艺得到的辙叉用新型贝氏体钢进行滚动接触疲劳性能试验,结果表明由电渣重熔工艺得到的新型辙叉用贝氏体钢具有更加优良的接触疲劳性能,且两种工艺的材料接触疲劳寿命都随试验应力的增加而降低。相较于... 分别对用普通冶炼工艺和电渣重熔工艺得到的辙叉用新型贝氏体钢进行滚动接触疲劳性能试验,结果表明由电渣重熔工艺得到的新型辙叉用贝氏体钢具有更加优良的接触疲劳性能,且两种工艺的材料接触疲劳寿命都随试验应力的增加而降低。相较于纯滚动试验,滑差的存在将增大材料的塑性变形和造成材料温度升高,引起材料接触疲劳寿命的显著下降。通过观察发现,新型辙叉用贝氏体钢的主要失效形式为麻点剥落和浅层剥落。 展开更多
关键词 电渣重熔 贝氏体钢 辙叉 滚动接触疲劳
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表达猪白介素2基因重组腺病毒的构建及其免疫增强作用 被引量：3
11
作者 何雷 张彦明 +5 位作者 向华 唐青海 徐彦召 杨小云 王静 代晨 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1-7,共7页
以猪白介素2基因(pIL-2)为研究对象构建表达pIL-2的重组腺病毒,并研究其作为细胞因子佐剂的免疫增强作用。用RT-PCR的方法扩增pIL-2基因,将pIL-2基因克隆到腺病毒穿梭载体AdTrack中,构建出重组腺病毒穿梭质粒AdTrack-pIL-2,然后在大肠杆... 以猪白介素2基因(pIL-2)为研究对象构建表达pIL-2的重组腺病毒,并研究其作为细胞因子佐剂的免疫增强作用。用RT-PCR的方法扩增pIL-2基因,将pIL-2基因克隆到腺病毒穿梭载体AdTrack中,构建出重组腺病毒穿梭质粒AdTrack-pIL-2,然后在大肠杆菌BJ5183内和骨架载体AdEasy同源重组,获得重组腺病毒骨架载体AdEasy-pIL-2,转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒Ad-pIL-2,并通过兔体交互试验来检测Ad-pIL-2的免疫增强作用。经PCR、RT-PCR和Western blot检测,成功构建了Ad-pIL-2,病毒滴度可以达到108.25pfu/mL,并通过兔体交互免疫试验证明Ad-pIL-2可以提高兔的抗体水平。用腺病毒构建的Ad-pIL-2在兔体上具有免疫增强作用,为下一步的猪体试验研究和细胞因子佐剂的开发奠定基础。 展开更多
关键词 猪白介素2 重组腺病毒 细胞因子 佐剂
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基于云模型的电力变压器状态综合评判 被引量：13
12
作者 何雷 李丽平 《华北电力大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2009年第3期98-103,共6页
针对现有电力变压器模糊综合评判中只考虑指标模糊性而忽视随机性的问题,提出了新的基于云模型的电力变压器状态综合评判方法。采用层次分析法获取指标的权重信息,利用变权模式对定量指标权重进行修正,采用云模型对定量数据进行表述,同... 针对现有电力变压器模糊综合评判中只考虑指标模糊性而忽视随机性的问题,提出了新的基于云模型的电力变压器状态综合评判方法。采用层次分析法获取指标的权重信息,利用变权模式对定量指标权重进行修正,采用云模型对定量数据进行表述,同时考虑到了不确定性中的模糊性和随机性。实验环节证明该方法使评判结果更加接近实际,为变压器状态综合评判提供了一种有效可行的方法。 展开更多
关键词 电力变压器 云模型 变权 综合评价
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Inconel718合金电子束焊接头组织与缺陷分析 被引量：4
13
作者 何雷 陈文静 +2 位作者 谭天亮 栾道成 张波 《热加工工艺》 CSCD 北大核心 2014年第5期201-203,208,共4页
对Inconel718高温合金电子束焊焊缝及热影响区的气孔、微裂纹行为进行了分析。研究发现,由于焊缝金属中Ti、Al、B元素的偏析,生成γ/γ′以及Ni-B、(Ni、Cr)-Ni3B、Fe-FeB等低熔共晶,在焊接应力的作用下形成结晶裂纹。热影响区出现的液... 对Inconel718高温合金电子束焊焊缝及热影响区的气孔、微裂纹行为进行了分析。研究发现,由于焊缝金属中Ti、Al、B元素的偏析,生成γ/γ′以及Ni-B、(Ni、Cr)-Ni3B、Fe-FeB等低熔共晶,在焊接应力的作用下形成结晶裂纹。热影响区出现的液化裂纹起源于晶界处MC的不充分扩散溶解以及块状生成相的局部熔融造成溶质元素的富集。焊件焊面残留的油渍以及匙孔瞬态失衡是焊缝中形成气孔的主要因素。 展开更多
关键词 Inconel718高温合金 电子束焊 低熔共晶 匙孔
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微小RNA-30b通过下调活化T细胞核因子c1抑制大鼠血管平滑肌细胞钙化 被引量：3
14
作者 何雷 周薇 +4 位作者 白亚玲 张胜雷 张东雪 刘兰 徐金升 《中国血液净化》 CSCD 2021年第10期669-673,共5页
目的观察微小RNA(microRNA,miRNA)-30b通过调控活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T-cell c1,NFATc1)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的作用及机制。方法大鼠体外原代培养VSMCs,并分为正常组和... 目的观察微小RNA(microRNA,miRNA)-30b通过调控活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T-cell c1,NFATc1)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的作用及机制。方法大鼠体外原代培养VSMCs,并分为正常组和高磷组。采用ELISA法测定各组VSMCs碱性磷酸酶(ALP)的活性;采用茜素红染色及钙含量检测各组VSMCs的钙化;采用实时荧光定量PCR测定各组VSMCs miR-30b及NFATc1和Runx2表达,Western blot检测NFATc1、Runx2的蛋白表达。为进一步验证miR-30b对VSMCs的作用,给予miR-30b的类似物mimic-30b和抑制物inhibitor-30b,检测VSMCs的钙化及NFATc1、Runx2的表达和ALP的活性变化。结果与正常组比较,高磷诱导的VSMCs钙化增加(t=-13.324,P<0.001);NFATc1的RNA和蛋白表达量升高(t值分别为-4.621、-4.684,P值分别为0.010、0.009);Runx2的RNA和蛋白表达量升高(t值分别为-4.340、-3.860,P值分别为0.005、0.018);ALP活性升高(t=-12.636,P<0.001);miR-30b的表达降低(t=3.822,P=0.019)。转染inhibitor-30b后,inhibitor-30b组较未转染组、inhibitor-NC组的钙含量升高(F=606.554,P<0.001);NFATc1的RNA和蛋白表达量升高(F值分别为36.427、22.512,P值分别为<0.001、0.002);Runx2的RNA和蛋白表达量升高(F值分别为44.225、42.832,P值分别为<0.001、<0.001);ALP活性升高(F=347.356,P<0.001)。转染mimic-30b后,钙化降低(F=93.341,P<0.001);NFATc1的RNA和蛋白表达量降低(F值分别为69.841、6.090,P值分别为<0.001、0.036);Runx2的RNA和蛋白表达量降低(F值分别为44.780、841.081,P值分别为0.005、<0.001);ALP活性降低(F=197.829,P<0.001)。结论miRNA-30b可抑制VSMCs钙化,可能是通过下调NFATc1,进而下调Runx2表达,从而使VSMCs表型转化减少实现的。 展开更多
关键词 血管平滑肌细胞 血管钙化 表型转化 miR-30b T细胞核因子c1
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玻璃体切除术对外伤后早期眼球萎缩的疗效分析 被引量：5
15
作者 何雷 王文伟 +4 位作者 张荷珍 庞秀琴 张兰 王绍莉 周军 《眼外伤职业眼病杂志》 北大核心 1998年第5期405-406,共2页
目的探讨严重眼前后段外伤后早期眼球萎缩试行玻璃体切除要的疗效分析及其可行性。方法对27例行玻璃体切除联合手术，其中25例行硅油充填术.结果27例术中证实25例合并视网膜脱离，术后12例视网膜复位，6例部分复位，7例未复位。视力增... 目的探讨严重眼前后段外伤后早期眼球萎缩试行玻璃体切除要的疗效分析及其可行性。方法对27例行玻璃体切除联合手术，其中25例行硅油充填术.结果27例术中证实25例合并视网膜脱离，术后12例视网膜复位，6例部分复位，7例未复位。视力增进者占73％，脱盲占42．3％。结论对外伤后功能差，眼压低，伴前部及后部增殖性玻璃体视膜病变以及眼轴短的患者，只要肉眼看眼球萎缩不甚明显者，均可试行玻璃体切除术。 展开更多
关键词 眼球萎缩 玻璃体切除术 硅油 眼外伤
暂未订购
miRNA103在高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化中的作用 被引量：3
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作者 何雷 徐金升 +5 位作者 白亚玲 张慧然 周薇 张胜雷 刘兰 张彤彤 《山西医科大学学报》 CAS 2021年第1期50-55,共6页
目的观察微小RNA103(microRNA103,miR-103)在高磷诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化过程中的作用及机制。方法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,将VSMCs随机分为正常组和高磷(HP)组(给予10 mmol/Lβ-甘油磷酸盐刺... 目的观察微小RNA103(microRNA103,miR-103)在高磷诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化过程中的作用及机制。方法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,将VSMCs随机分为正常组和高磷(HP)组(给予10 mmol/Lβ-甘油磷酸盐刺激),刺激4 d后,收集细胞。采用ELISA法测定VSMCs中碱性磷酸酶(ALP)的活性变化;采用邻甲酚酞络合酮比色法及茜素红染色检测VSMCs的钙化情况;采用qPCR测定VSMCs中miR-103及成骨转录因子Runx2的表达情况,Western blot检测Runx2蛋白表达情况。为进一步验证miR-103对VSMCs的作用,将细胞分为6组:正常组、NC inhi-bitor组、miR-103 inhibitor组、高磷组、NC mimic+HP组、miR-103 mimic+HP组,测定各组VSMCs钙化情况以及Runx2表达和ALP活性的变化。结果与正常组比较,高磷组大鼠VSMCs钙化增加(P<0.05),Runx2表达及ALP活性显著升高(P<0.05),而miR-103 RNA水平显著降低(P<0.05)。转染miR-103 inhibitor后,与正常组和NC inhibitor组比较,miR-103 inhibitor组VSMCs钙化增加,Runx2表达及ALP活性显著升高(均P<0.05);转染miR-103 mimic后,与高磷组和NC mimic+HP组比较,miR-103 mimic+HP组VSMCs钙化减少,Runx2表达及ALP活性显著降低(均P<0.05)。结论高磷可能是通过抑制miR-103表达,促进VSMCs表型转化,从而诱导VSMCs钙化。 展开更多
关键词 血管平滑肌细胞 β-甘油磷酸盐 表型转化 血管钙化 miR-103
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基于改进P-S模型工程抢修抢建风险预警方法 被引量：2
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作者 何雷 王凤山 +1 位作者 陈艳 刘渊 《解放军理工大学学报（自然科学版）》 EI 北大核心 2012年第2期183-188,共6页
为适应风险预警"风险可能性低、安全满意度高"的心理特征与期望,提出了一种基于改进可能满意度的震后工程抢修抢建风险预警方法。在介绍可能满意度方法原理基础上,建立了震后工程抢修抢建风险预警模式,划分预警等级,确定多层... 为适应风险预警"风险可能性低、安全满意度高"的心理特征与期望,提出了一种基于改进可能满意度的震后工程抢修抢建风险预警方法。在介绍可能满意度方法原理基础上,建立了震后工程抢修抢建风险预警模式,划分预警等级,确定多层次风险预警等级的可能度、满意度函数,分析风险可能度与满意度的互逆变化特征,确定风险预警可能满意度的并合形式化表达,运用数据包络分析方法改进风险预警的可能满意度模型,确定震后工程抢修抢建风险预警的相对可能满意度模型。模型应用于边坡工程抢修作业进程中整体安全风险预警案例,结果表明方法合理、可行,具有较好的预警能力。 展开更多
关键词 风险预警 抢修抢建 地震 可能满意度 数据包络分析
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齐口裂腹鱼幼鱼对蛋白质、脂肪和碳水化合物需要量研究 被引量：9
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作者 何雷 冯健 《水生态学杂志》 北大核心 2008年第6期76-80,共5页
试验设21个日粮组,蛋白质、脂肪、碳水化合物梯度变化范围分别在33%～51%、3%～18%、23%～32%。在水温(25.25±1.91)℃条件下,在水泥池中对平均体重为(2.01±0.04)g的360尾齐口裂腹鱼进行了60d的生长试验,研究日粮中蛋白质、脂... 试验设21个日粮组,蛋白质、脂肪、碳水化合物梯度变化范围分别在33%～51%、3%～18%、23%～32%。在水温(25.25±1.91)℃条件下,在水泥池中对平均体重为(2.01±0.04)g的360尾齐口裂腹鱼进行了60d的生长试验,研究日粮中蛋白质、脂肪和碳水化合物对齐口裂腹鱼生长、体组成和肝脏组织的影响。结果表明:各组鱼特定生长率随着日粮蛋白质水平的增加而增加;体蛋白含量不受日粮组成的影响,体脂肪随着日粮脂肪水平的增加而增加,体碳水化合物受日粮碳水化合物的影响极显著,而不受日粮蛋白质和脂肪的影响。齐口裂腹鱼幼鱼能耐忍23%～26%的碳水化合物水平,且能利用6%～12%的日粮脂肪。基于齐口裂腹鱼幼鱼对日粮碳水化合物和脂肪含量需求分别为23%～26%和6%～12%时,蛋白质需求量为42%～48%,能蛋比为41.3kJ/g。 展开更多
关键词 齐口裂腹鱼 幼鱼 蛋白质 脂肪 碳水化合物
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超表达猪STING蛋白细胞株的建立及其对猪瘟病毒增殖的影响 被引量：1
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作者 何雷 郁川 +8 位作者 林吉辉 贾艳艳 余祖华 李小康 李静 丁轲 李银聚 吴庭才 张春杰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期315-320,共6页
为构建表达猪干扰素刺激因子(STIN G)的真核表达载体(pEGFP-STING),进而用细胞转染和亚克隆筛选的方法建立超表达STING蛋白的猪脐静脉血管内皮细胞(SU VEC)细胞株。通过RT-PCR扩增STING基因,构建表达STING的真核表达载体pEGFP-STING,通... 为构建表达猪干扰素刺激因子(STIN G)的真核表达载体(pEGFP-STING),进而用细胞转染和亚克隆筛选的方法建立超表达STING蛋白的猪脐静脉血管内皮细胞(SU VEC)细胞株。通过RT-PCR扩增STING基因,构建表达STING的真核表达载体pEGFP-STING,通过Lipofectam ine 2000介导转染至永生化猪血管内皮细胞(SUVECs)中表达。在转染的基础上添加1 500 g/m L G418进行抗性筛选,获得稳定表达STING蛋白的细胞克隆,进一步用荧光共聚焦显微镜观察STING蛋白在细胞内的定位,建立稳定表达STING蛋白的SUVEC细胞株。在此基础之上,猪瘟病毒(CSFV)感染48 h后,通过Real-time PCR法检测稳定表达猪STING蛋白对猪瘟病毒复制的影响。PCR、酶切和测序结果表明,成功扩增猪STING基因并正确插入载体pEGFP-C1中,基因序列与Gen Bank的完全一致。转染SUVECs细胞后,STING蛋白在宿主细胞内被成功表达,并且主要表达在细胞质中。经G418抗性筛选出表达STING蛋白的细胞株后,经RT-PCR和W estern-blot检测表明,STING蛋白在SUVEC细胞中被稳定转录和表达,定位于SUVEC细胞的内质网上面。Real-time PCR检测表明,STING蛋白的超表达促进了CSFV的复制。本研究通过构建猪STING蛋白的真核表达载体实现了STING蛋白在SUVEC细胞中的超表达,建立了稳定表达STING蛋白的SUVEC细胞株。 展开更多
关键词 猪干扰素刺激因子 先天性免疫反应 血管内皮细胞 细胞株
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稳定表达猪传染性胃肠炎病毒N蛋白的ST细胞株的构建及其亚细胞定位 被引量：1
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作者 何雷 贾艳艳 +7 位作者 郁川 余祖华 丁轲 李静 程相朝 李银聚 张春杰 金修哲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期101-104,共4页
为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白的表达对宿主细胞功能的影响,本研究通过构建TGEV N基因的重组表达质粒p EGFP-N,将其转染于猪睾丸(ST)细胞中,并在活细胞状态下直接观察GFP-N蛋白在ST细胞中的表达与定位。结果显示,转染后4 h^5 h... 为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白的表达对宿主细胞功能的影响,本研究通过构建TGEV N基因的重组表达质粒p EGFP-N,将其转染于猪睾丸(ST)细胞中,并在活细胞状态下直接观察GFP-N蛋白在ST细胞中的表达与定位。结果显示,转染后4 h^5 h出现荧光蛋白表达,24 h达到高峰,TGEV的N蛋白主要定位于细胞质中,进一步的激光共聚焦共定位显示TGEV N蛋白主要定位于ST细胞的内质网上面。以G418筛选4周后,转染细胞形成稳定的细胞株,RT-PCR和western blot验证TGEV N蛋白的m RNA及其蛋白在ST细胞中稳定表达,提示本研究建立了稳定表达的TGEV N蛋白的ST细胞株,为进一步研究TGEV N蛋白对ST细胞的生理功能的影响及其在TGEV致病过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 N蛋白 亚细胞定位 细胞株
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