摘要
目的 克隆并原核表达趋化因子 ,研究其结构与功能。方法 RT PCR技术 ,DNA测序和计算机网上比对 ,DNA重组及原核表达技术 ,离子交换层析技术 ,半固体骨髓集落培养。结果 在利用RT PCR扩增趋化因子MPIF 1的过程中发现存在一种新的变异体形式。该变异体比MPIF 1多5 1个碱基 ,编码的蛋白质比MPIF 1长 17个氨基酸 ,基因定位于人类第 17号染色体上 ,其序列符合内含子和外显子的剪切规律 ,因而很可能为MPIF 1的mRNA不同剪切形式 ,将其命名为MPIF 1β。应用DNA重组技术构建原核表达质粒PKPL MPIF 1β ,转化大肠杆菌 ,诱导表达 ,获得重组蛋白。SDS PAGE表明MPIF 1β的表达效率达 15 % ,相对分子质量 (Mr)约为 (14～ 15 )× 10 3。功能研究表明 ,MPIF 1β有抑制小鼠骨髓集落形成的作用。结论 MPIF 1β是与MPIF 1功能类似的新变异体。
Objective To study the structure and function of MPIF-1 (meyoloid progenitor inhibitory factor-1). Mehtods RT-PCR, DNA sequencing, computer comparision, DNA recombination and prokaryotic expression, ionexchange chromatography. Results There was a novel spliced isoform MPIF-1β. DNA sequencing showed additional 17 amino acids encoded by the third exon, and replaced the 5′R with a G. SDS-PAGE showed that MPIF-1β recombinant protein has a molecular mass about 14kD-15kD. Bioassay showed that the MPIF-1β can also inhibite haemopoietic stem cell proliferation. Conclusion The MPIF-1β is a novel isoform of MPIF-1 with similar bioactivity. [
出处
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第2期115-118,共4页
Chinese Journal of Microbiology and Immunology
